免疫缺陷模型 裸鼠

BALB/c Nude, CD-1 Nude, 和NU/NU三者有什么区别?

1. 属于三个不同的品系: (1)BALB/c Nude来源于BALB/c小鼠基因突变; (2)NU/NU裸鼠最初由NIH培育成功,是一个独立的封闭群品系; (3)CD-1 Nude,将nu基因导入CD-1小鼠获得该品系。

2. 遗传学控制不同: (1)BALB/c Nude为近交系,兄妹交配方式进行繁殖,后代基因纯合程度高,个体间差异小; (2)NU/NU、CD-1 Nude为封闭群,随机交配方式进行繁殖,后代基因纯合程度低,个体间差异大。

3. 生理学性状的相同点: 繁育方式均采用♂nu/nu×♀nu/+,后代个体均有纯合体 “nu/nu”(无毛)和杂合体“nu/+”(有毛)之分,比例接近1:1 。

4. 免疫缺陷角度:三者相同 都没有胸腺,不能产生T淋巴细胞;但是B淋巴细胞和NK细胞功能正常。

5. 使用角度 BALB/c Nude、NU/NU、CD-1 Nude均可用于肿瘤学研究和肿瘤移植(不排除三种裸鼠对某些特定瘤株的差异)。

我购买的裸鼠养了一段时间后,发现体表有大量皮屑,请问是什么原因?

出现这个现象一般有两个方面的原因:

1)弥漫性皮炎:细菌、真菌感染、营养因素缺乏引起的皮肤角质化现象。这种弥漫性皮炎症状一般为散发出现,同一个笼盒内动物个体之间不具备传染性。此时,牛棒状杆菌检测为阴性。

2)第二个原因是裸鼠感染了牛棒状杆菌(Corynebacterium bovis),导致皮肤“鳞屑”现象。此时,如果将裸鼠送检,可以检测到牛棒状杆菌为阳性:

a)革兰氏阳性杆菌 b)是一种最常见的大棒状杆菌(Large Corynebacterium) c)免疫功能正常的大小鼠一般不会感染 d)对无毛鼠和免疫缺陷鼠致病,一旦感染,几乎是终身携带 e)组织学检查可见弥漫性棘层肥厚 f)临床症状:感染后7-10天出现“鳞屑”症状,该症状会在14-20天后消失 g)对动物影响:体重减轻、摄水量增加、移植物生长缓慢、对化疗敏感性增加 h)去除:感染后很难消除。需要环境彻底消毒,动物重新引种或净化

感染了棒状杆菌的裸小鼠会传染吗?

会传染。牛棒状杆菌会存在于感染小鼠的皮屑中,可以通过空气和接触传播,能够引起同一笼和同一个房间其他个体的感染。

荷瘤裸小鼠感染了棒状杆菌,肿瘤还能用于传代保种吗?

不建议继续传代保种。

(1)牛棒状杆菌主要感染和作用部位为皮肤,同时从被感染动物的粪便、口咽部或被污染的环境中都可以分离到病菌。其对动物的影响主要为因皮肤损伤、厌食、瘙痒引起的脱水及体重 丢失,对免疫系统的影响未知。

(2)有美国专家提到过牛棒状杆菌可能会污染肿瘤组织,并随其传代而感染其他动物。也许归因于下面的原因:

a) 取材时的污染:荷瘤鼠感染了牛棒状杆菌,一方面机体自身在较长的一段时间内会携带该菌,同时由于牛棒状杆菌存在于皮屑中,可以传播到(或附着在)房间内任何一个地方,笼架 具、地面、墙壁、天花板、门手,甚至操作人员的手套、用于肿瘤组织取材的工作台、手术器械,因此取材时如果稍不注意,就会被污染,污染后的肿瘤组织自然会导致后一批被接种个体的 感染。 b) 环境对动物的污染:由于牛棒状杆菌是一种很难、很难根除的细菌,接种了干净肿瘤组织的小鼠如果饲养在没有彻底根除牛棒状杆菌的环境中,也会出现阳性感染。

对于牛棒状杆菌感染,有哪些可行性预防措施?

(1) 硬件设施:大小鼠应饲养在SPF级动物设施中,具体硬件指标应符合GB 14925的要求。

(2) 仪器设备、实验器材:笼盒、笼架等采取高温(≥80℃)和/或高压灭菌的方式进行消毒,不适合高压的仪器设备、实验器材使用含有效氯2000mg/L的消毒液(或1:5:1 CLIDOX)或 同等效力消毒剂进行表面擦拭。

(3) 物料:采用辐照或高压灭菌的饲料、垫料、水,定期进行无菌检测;其余物料进行高压或其他灭菌方式处理,保证灭菌效果。

(4) 人员:固定人员(饲养员、实验员)进行同一房间的动物处理,不交叉处理其他房间内动物。若实验人员同时进行不同实验项目,则应保证先操作裸鼠品系,再操作其他品系。

(5) 日常清洁消毒:不只局限于动物房的饲养间,其它包括实验间、走廊、更衣室、缓冲间等,都应使用含有效氯400~700 mg/L的消毒液(或1:18:1 CLIDOX)进行地面、墙面、天花板、 桌面、房门、笼架、笼具及其他设备外表面等的消毒。

(6) 笼盒操作:尽可能减少笼盒操作,若同一房间内放置了多个批次、多种品系的动物,建议先操作新到的裸鼠品系,再操作其他品系。如果一个饲养间内既有裸鼠,也有免疫程度更为严 重的有毛SCID鼠,建议先操作裸鼠,再操作SCID鼠(因为现有资料证明牛棒只感染无毛鼠,这或许与无毛鼠缺少毛发这层物理屏障有关)。

a) 饲养/实验人员应穿着全套灭菌PPE(隔离衣、口罩、头套、鞋套、手套等),操作前使用含有效氯2000mg/L的消毒液(或1:5:1 CLIDOX)充分消毒手套,同时建议佩戴双层手套,并 密封手套与袖口连接处; b) 在关闭超净台或生物安全柜紫外灯之前,应确保已照射灭菌20min。开启通风,再次使用含有效氯2000mg/L的消毒液(或1:5:1 CLIDOX)进行内部喷雾消毒; c) 从笼架上取下笼盒,使用含有效氯2000mg/L的消毒液(或1:5:1 CLIDOX)喷雾笼盒外表面,并放置于超净台或生物安全柜中; d) 在超净台或生物安全柜中操作笼盒时,应确保双手位于风幕内10cm; e) 将小鼠从脏盒转移至新盒中时,建议使用镊子,而且最好交替使用2把。一把在用时,另一把可浸泡于含有效氯2000mg/L的消毒液(或1:5:1 CLIDOX)中消毒,镊子浸泡消毒的时间应 不低于3min。同一笼盒动物可使用同把镊子,但不同笼盒需更换不同镊子。消毒剂应保证当天新鲜配制,以防有机碎屑积累过多而导致消毒效果降低。 f) 操作完一个笼盒,应使用酒精对手套进行喷雾消毒,然后再进行下一笼盒的操作。每操作完同一个实验项目、同一个动物品系或一面IVC笼架(最多不超过70盒),都应及时更换新手 套,以减少交叉感染的可能。 g) 垃圾处理:脏垫料、实验废弃物、动物尸体等应及时封袋,储存于指定位置,无遗洒。每日垃圾应有专人负责收集,收集后该人员不得再接触动物,并用含有效氯2000mg/L的消毒液 (或1:5:1 CLIDOX)对垃圾箱进行喷雾消毒。

对于牛棒状杆菌感染,如何进行日常观察及病情判断?

研究过程中如果用到裸鼠,除了实验本身要求的所做观察项目之外,研究人员还应增加一项裸鼠皮肤皮屑的观察。如果观察到某只裸鼠皮肤表面出 现了大量皮屑,应立即引起足够重视:有可能是单纯弥漫性皮炎,也有可能是牛棒状杆菌感染。如果是前者,皮屑症状往往仅表现为个体散发,且同笼动物之间不会互相传染,牛棒状杆菌的 检测呈阴性。如果某只动物出现皮屑症状后,同笼或邻近笼盒的动物在后续3-5天内也全部出现相同症状,基本上可以判断为牛棒状杆菌感染。

如果出现牛棒状杆菌感染,如何进行后续操作?

(1) 患病动物处理:观察到牛棒状杆菌感染的现象后,建议对患病动物进行应急检测(细菌培养或PCR)。如果的确感染了牛棒状杆菌,一般不建议对患病动物进行治疗。建议立即将同笼 动物全部淘汰,密封并进行无害化处理;笼盒(包含盒内物料)进行高压处理后再进行脏垫料倾倒、清洗、消毒处理。若动物极其珍贵或治疗处理不影响实验研究,患病动物可以通过给予抗 生素治疗减少临床症状,牛棒状杆菌对四环素、恩诺沙星和氨苄西林敏感。同时,可以使用碘液等对病变皮肤进行局部涂抹,每日1-2次,可改善皮肤病变,但已增生的角质需较长时间恢复( 不可使用含氯或含醛成分的药物涂抹皮肤)。由于抗生素治疗仅能抑制临床症状,而不能根除牛棒状杆菌,故对于珍贵动物,需通过胚胎移植或剖腹产等手段进行净化。

(2) 动物种群处理:如果种群内检测到有牛棒状杆菌阳性个体存在,建议全群淘汰。

(3) 设施净化:受感染的动物全部淘汰后,可通过熏蒸(例如,甲醛、过氧化氢等)方式重新净化房间。房间无菌状况检测合格后,方可引进牛棒状杆菌检验为阴性的动物。同时在后续 管理中,建议加强生物防控措施,密切观察动物状况,防止该病再次感染和蔓延。

为什么我收到的裸鼠有的个体长毛?

裸鼠并不是真正意义上的无毛,长毛是一种正常的生理现象。

裸鼠毛囊与正常有毛鼠相比,毛囊数量和功能都没有差别,均能够产生正常的毛根和毛杆。但对于纯合子裸鼠来说,由于Foxn1基因功能缺失,毛杆中缺乏角蛋白而变得非常纤弱,绝大部 分毛杆不能正常穿透表皮,而是扭曲盘绕在膨胀的毛囊漏斗内,因此皮肤眼观上为光裸的。

裸鼠出生后大约十天左右,在头面部、颈部可见稀疏的毛发生长;随着周龄增加,到5-6周,在躯干的其他部位也可见稀疏毛发的生长。

维通利华专门委托部分客户进行了对比实验,从肿瘤接种实验和药物研发单位提供的使用情况来看,这部分长有稀疏被毛的裸鼠对实验结果没有影响。

(Mecklenburg L, Tychsen B, Paus R. 2005, Learning from nudity: lessons from the nude phenotype. [J] Exp Dermatol.14: 797–810.)

a:野生型(+/+ )正常发育的毛杆 b:裸鼠毛杆纤弱,扭曲盘绕在膨胀的毛囊漏斗内 c:野生型(+/+ )毛囊 d:裸鼠毛囊与野生型(+/+ )相比,没有明显区别